Assessment of in vitro maturation of bovine oocytes by the presence of the first polar body and hoechst staining
DOI:
https://doi.org/10.47808/revistabioagro.v10i2.436Keywords:
Oocyte, bovine, maduration, Hoechst 33342Abstract
The aim of this study was to use Hoechst 33342 staining to confirm in vitro maturation of bovine oocytes in addition to the identification of the first polar body. Forty-eight ovaries obtained from the slaughterhouse at the time of cow slaughter were transported in SSF with 1% antibiotic at room temperature. Once in the laboratory, the oocytes were obtained by aspiration of follicles with a diameter of 2-6 mm. Quality I and II oocytes, according to Loos classification and International Embryo Transfer Society (IETS) standards, were selected and cultured for maturation in TCM-199 medium, added with 10% fetal bovine serum (FBS), 0. 5 μg/ml FSH, 0.1 IU/ml hCG, 50 μg/ml gentamicin and 0.2 mM/ml sodium pyruvate, under conditions of 5% CO2, 38.5 ºC and 100% relative humidity for 24 hours. Oocytes presenting the first polar body were considered mature and selected to confirm the meiotic stage by Hoechst 0.5 μg/ml 33342 staining for 10 minutes, to confirm the maturation stage. The results obtained were 88% of oocytes with good expansion of the cumulus, and 72.7% of maturation confirmed by Hoechst 33342 staining; it is concluded that it is essential to evaluate with accurate techniques each of the stages involved in the technique, to understand why there are variations in the results with the different protocols used for in vitro oocyte maturation.
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